단일세포 및 초저사용량 RNA-Seq

단일세포 RNA 시퀀싱 소개

복잡한 생물학적 체계는 개별 세포의 조정된 기능에 의해 결정됩니다. 벌크 유전체(bulk genome) 또는 전사체 데이터를 제공하는 기존의 방법으로는 이러한 복잡성을 유발하는 세포 이질성을 밝힐 수 없습니다. 단일세포 시퀀싱은 개별 세포의 유전체 또는 전사체를 검사하여 세포 간 변이에 대한 고분해능 보기를 제공하는 차세대 시퀀싱(NGS) 방법입니다.

초저사용량 및 단일세포 RNA 시퀀싱(scRNA-Seq) 방법을 통해 연구진은 복잡한 조직에서 개별 세포의 독특한 생물학을 탐색하고 환경 단서에 대한 세포 아집단 반응을 이해할 수 있습니다. 민감도 높은 scRNA-Seq 접근법은 분화, 증식, 종양 형성 등 시간 의존적 과정에서 세포 기능 및 이질성을 연구하는 데 유용합니다. 

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단일세포 RNA-Seq의 장점

단일세포 및 초저사용량 RNA-Seq 방법은 최소한의 사용량으로 편향되지 않은 방식으로 전사체를 연구하기 위한 강력한 도구입니다. 단일세포 RNA 시퀀싱은 다양한 연구 분야에 적용될 수 있으며, 건강과 질병에서 세포 기능에 대한 이해를 변화시킬 가능성이 있습니다. 

  • 고품질 샘플을 위한 단일세포 사용량 수준까지 강력한 전사체 분석.
  • 통합 프로토콜은 전체 세포에서 직접 진행되며 샘플 무결성을 보존합니다.
  • 고해상도 분석을 통해 일반적으로 벌크 샘플링 및 RNA-Seq 방법으로 가려지는 세포 차이를 발견할 수 있습니다.

단일세포 시퀀싱 및 분석 워크플로우 비디오

단일세포 시퀀싱을 실시하면 어떤 세포 타입이 존재하는지, 각각의 세포가 복잡한 생물학적 체계의 기능에 어떤 방식으로 기여하는지 발견할 수 있습니다. 조직 준비부터 분석에 이르기까지 Illumina 단일세포 시퀀싱 워크플로우를 활용하는 방법을 확인해보세요.

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벌크 및 단일세포 RNA-Seq 간의 차이

벌크 RNA-Seq는 전체 조직에 대한 통찰력을 제공하는 데 탁월합니다. 이는 연구자들이 큰 그림을 이해하는 데 도움이 될 수 있으며 새로운 발견을 위한 비표적 접근법으로 사용될 수 있습니다. 그러나, 벌크 RNA-Seq는 줄기 세포 또는 순환 종양 세포와 같이 드물지만 생물학적으로 관련된 아집단에서 전사물을 캡처하지 못할 수 있습니다. 또한, 벌크 RNA-Seq에서 식별된 저발현 유전자는 대신 희귀 세포 타입에서 강건하게 발현될 수 있습니다.

대조적으로, 개별 세포에 대해 단일세포 RNA 시퀀싱 데이터가 생성되어, 동일한 검체 내 세포 간의 미묘한 구분에 대한 보다 깊은 통찰력을 가능하게 합니다. 개별 세포 간의 변이는 동일한 세포 아집단을 검사할 때에도 엄청날 수 있습니다. 이는 특히 전사체, 즉 유전체 및 후성유전체의 상대적 안정성에 비해 반응성이 더 높고 역동적인 유전체에 적용됩니다.  단일세포 분해능에서 복잡한 장기 및 조직을 검사하는 것은 많은 질병 및 시스템에 대한 이해를 증진하는 데 매우 중요합니다. 

고처리량 및 저처리량 scRNA-Seq 방법

단일세포 RNA 시퀀싱 방법은 세포 처리량으로 구분할 수 있습니다.

실험당 수억에서 수백만 개의 세포를 비용 효과적인 방식으로 검사하고자 하는 연구자들에게는 고처리량 단일세포 프로파일링 방법이 권장됩니다. 

저처리량 방법은 실험당 수십 개에서 수백 개의 세포를 처리해야 하는 과학자들에게 권장됩니다. 저처리량 접근법은 일반적으로 기계적 조작 또는 세포 분류/분할 기술을 포함합니다.

아래에서 고처리량 및 저처리량 단일세포 RNA-Seq 방법에 대한 워크플로우를 살펴보세요. 두 방법 모두 검증된 Illumina sequencing by synthesis(SBS) chemistry를 활용합니다. Illumina의 시퀀싱 시스템은 규모와 상관없이 단일세포 시퀀싱 연구에 이용할 수 있는 입증된 NGS 솔루션을 제공하기 위해 유연한 처리량과 높은 데이터 정확도를 지원하고 있습니다.

초저사용량 및 단일세포 RNA-Seq을 위한 고처리량 워크플로우

이 민감하고 확장 가능하며 비용 효과적인 고처리량 scRNA-Seq 방법을 통해 유전자 발현에 대한 귀중한 인사이트를 얻으세요.

초저사용량 및 단일세포 RNA-Seq을 위한 저사용량 워크플로우

아래의 저처리량 방법은 실험당 수십에서 수백 개의 세포와 같이 특정 연구를 위해 적은 수의 세포를 처리하려는 연구진에게 권장됩니다.

단일세포 RNA-Seq 데이터 분석 및 통찰력

세포 분리 기기가 필요하지 않은 간단한 수작업 워크플로우를 통해 mRNA 캡처, 바코드 및 라이브러리 준비를 위한 접근 가능하고 확장성이 뛰어난 단일 세포 RNA-Seq 솔루션입니다.

  • RNA-Seq 정렬 및 주석이 달린 유전자와의 매칭을 통해 전사물 판독 수행
  • 바코드 판독을 위한 셀 바코드 및 UMI 오류 수정
  • 유전형 기반 및 유전형이 없는 샘플 디멀티플렉싱

Partek Flow는 온프레미스 독립형 3차 멀티오믹스 분석 옵션을 제공하며 다양한 상용 assay를 지원합니다.

  • 인기 있는 온라인 저장소에서 자신의 데이터 또는 공개 데이터를 가져오세요
  • 배치 효과를 제거하여 생물학적 정보를 발견하세요
  • 가상 대량 분석을 수행하세요

대화형 시각화, 인프라 확장성 및 안전한 데이터 관리를 통해 샘플부터 인사이트 도출까지의 워크플로우를 가능하게 하는 강력한 클라우드 기반 멀티오믹스 분석 및 해석 소프트웨어입니다.

  • 소규모 데이터 세트와 대규모 멀티오믹스 연구 모두에 적합하며 여러 샘플 종류를 지원합니다.
  • 결과를 선별된 생물학적 지식에 연결하여 더 깊이 있는 해석을 할 수 있습니다.
  • 복잡한 대규모 데이터 세트에서 인사이트를 밝혀내고 게시 가능 수치를 얻을 수 있습니다.

단일세포 시퀀싱 적용

단일세포 시퀀싱을 통해 광범위한 적용이 가능하므로 연구자는 복잡한 생물학적 시스템을 이해하는 데 상당한 진전을 이룰 수 있습니다. 인기 있는 애플리케이션의 예는 다음과 같습니다.

  • 암 연구: scRNA-Seq는 종양 비균질성, 희귀한 치료 내성 세포 집단, 면역요법 반응에 대한 획기적인 연구를 뒷받침해왔습니다.
  • 줄기 세포 생물학: 단일세포 시퀀싱 접근법은 줄기 세포 아집단에서 전사 이질성 특성을 확인할 수 있게 합니다.
  • 면역학 연구: scRNA-Seq 방법은 면역 세포 발생, 자가면역 질환, 희귀 면역 세포 아집단에 대한 연구를 발전시키고 있습니다.
  • 신경생물학: 연구자들은 단일세포 RNA-Seq를 활용하여 뇌 병리학을 연구하고 질병 특이적 전사체 프로파일링 연구를 수행할 수 있습니다.
단일세포 전사체에 대한 집중 조명

scRNA-Seq의 새로운 애플리케이션에 대해 자세히 알아보고 복잡한 세포 생물학에 대한 심층적인 통찰력을 발견하세요.

단일세포 RNA-Seq FAQ

단일세포 RNA 시퀀싱은 개별 세포 수준에서 유전자 발현을 프로파일링하는 데 사용되어, 복잡한 세포 표현형에 대한 고해상도 보기를 가능하게 합니다. 이 방법은 단일 세포 수준에서 세포 이질성과 유전자 발현의 동적 변화를 발견합니다.1
scRNA-Seq은 암 연구, 면역학 및 자가면역, 줄기세포 생물학, 발달 생물학 및 신경과학을 포함한 기본 연구, 중개 연구 및 임상 연구 분야에 걸쳐 광범위한 유용성을 가지고 있습니다. 이러한 강력한 방법은 이질적인 세포 군집(heterogeneous cell population)을 연구하고 희귀 세포 유형을 발견하며 세포 레벨에서 질병 및 발달 과정의 특징을 확인하는 데 사용됩니다.1,2
벌크 RNA-Seq 접근법과 달리, 단일세포 RNA-Seq는 고도로 이질적인 세포 집단 내에서 주어진 세포에 대한 상세한 전사 프로파일을 제공합니다. 이러한 수준의 해상도는 종양을 포함한 복잡한 조직 또는 면역세포 집단에서 특히 중요합니다. 또한, 단일세포 RNA-Seq는 희귀하고 풍부도가 낮은 전사체를 검출하고, 새로운 전사체 동형 및 조절 기전을 식별하며, 질병 병리생물학을 더 잘 이해할 수 있는 민감한 방법입니다.
단일세포 RNA 시퀀싱은 각 세포에서 발현되는 유전자, 전사체 시그니처에 기반해 세포 표현형이 어떻게 다른지, 그리고 유전자 발현이 환경, 질병 과정, 치료에 의해 어떻게 영향을 받는지 밝혀내 세포 동일성과 기능에 대한 고해상도 스냅샷을 제공합니다. 예를 들어, 단일세포 RNA 시퀀싱을 사용하여 전사 시그니처를 통해 특정 면역 세포 아집단을 식별 및 특성을 확인하고 가능한 세포 운명 결정을 밝혀낼 수 있습니다.3
기술적인 문제와 생물학적 요인으로 인해 단일세포 RNA 시퀀싱 데이터는 벌크 RNA 시퀀싱에 비해 잡음과 복잡성이 더 많은 것으로 보고됩니다. scRNA-Seq 데이터의 변동성이 크면 계산 분석 및 데이터 해석이 어려울 수 있습니다.4 또한 확장이 제한되고 시약 비용이 높으며 특수 자본 장비가 필요하기 때문에 단일세포 RNA 시퀀싱의 광범위한 채택이 느려졌습니다.
Illumina Single Cell 3' RNA Prep 키트를 사용하면 값비싼 미세유체공학 장비나 복잡한 워크플로우 없이 어떻게 단일세포 mRNA 포획, 바코딩, 라이브러리 준비를 할 수 있는지 알아보십시오.
PIPseq chemistry는 확장 가능하고 간단한 단일세포 RNA 캡처 및 바코딩을 가능하게 합니다. PIP은 particle-templated instant partition의 약자로, 하이드로겔 비드(hydrogel bead) 결합 후 바코드가 부착된 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)를 포함하는 템플릿 입자를 사용해 유화(emulsification)를 진행하는 assay입니다. 샘플 준비 단계에서 관심 세포 현탁액(cell suspension)이 템플릿 입자 및 오일과 혼합된 후 볼텍싱을 통해 템플릿화된 유화액(emulsion)으로 분리됩니다. 유화액 내 세포가 용해되면, 바코드가 부착된 템플릿이 mRNA를 포획합니다. 이후 유화액이 분해되고 포획된 mRNA에서 역전사(reverse transcription) 과정을 통해 cDNA가 생성되며 증폭(amplification)을 거치면 각각의 세포에 대한 cDNA 라이브러리가 만들어집니다. 그 다음 단일세포 cDNA 라이브러리는 일반적인 라이브러리 준비 방법을 사용해 시퀀싱 라이브러리로 처리된 후 NGS 분석이 진행됩니다.
Illumina Single Cell 3' RNA Prep 키트 페이지에서 scRNA-Seq 애플리케이션에서의 PIPseq chemistry 사용에 대해 자세히 알아보십시오.
최적의 시퀀싱 깊이는 RNA 함량이 다양한 샘플 유형, 원하는 실험 결과 및 시퀀싱 플랫폼의 처리량 기능을 포함한 다양한 요인에 따라 달라집니다.
Illumina Single Cell 3’ RNA Prep 키트의 경우, 샘플 유형 전반에서 캡처 효율성의 변동성으로 인해 캡처된 셀의 예상 수가 아닌 입력 셀당 리드(RPIC)를 사용하여 권장 시퀀싱 리드 깊이를 계산합니다.
자세한 내용은 단일세포 RNA 준비 FAQ 및 리소스 페이지를 참조하십시오.
단일세포 RNA 시퀀싱에 권장되는 세포의 수는 실험 목표와 어떤 방법을 원하는지에 따라 다릅니다. Illumina Single Cell 3’ RNA Prep 키트의 경우, 단일세포 RNA 시퀀싱에 약 100~200,000개의 세포가 권장됩니다.
자세한 내용은 간소화된 워크플로우 및 사양 표가 있는 Illumina Single Cell 3' RNA Prep 키트 페이지를 참조하십시오.
단일세포 RNA 시퀀싱은 신선, 냉동 또는 DSP-메탄올 고정 세포와 핵뿐만 아니라 다양한 종의 전체 조직 샘플을 포함한 다양한 샘플 유형에 대해 수행될 수 있습니다. 또한, scRNA-Seq는 세포 배양, 혈액, 및 오가노이드와 같은 다양한 생물학적 공급원에 적용될 수 있습니다.5
단일세포 RNA 시퀀싱을 위해 조직에서 단일세포 현탁액을 준비하려면 조직을 개별 세포로 해리해야 합니다. 이는 전형적으로 기계적 방법과 효소적 방법의 조합을 통해 달성됩니다. 가혹한 조건이 세포에 스트레스를 주고 유전자 발현에 영향을 미칠 수 있으므로 세포 수율과 생존력의 균형을 맞추기 위해서는 세심한 최적화가 중요합니다.6
단일세포 RNA 시퀀싱은 일반적으로 신선 세포에서 실시되지만, DSP-메탄올 고정 또는 동결 세포를 사용할 수 있으나, 여기에는 한계와 함께 고려해야 할 사항이 있습니다. 동결은 세포 사멸, RNA 분해, 유전자 발현 프로파일 변경을 유발할 수 있습니다.
냉동 세포를 사용하는 경우, 냉동 및 해동 중 손상을 최소화하기 위해 적절한 배지에서 단일세포 현탁액 및 동결보존 세포로 시작하도록 권장됩니다. 냉동 조직의 경우, 해동 후 생존 세포를 해리하고 회수하는 데 따르는 어려움으로 인해 단일세포를 분리하는 것보다 단일핵 RNA 시퀀싱(snRNA-Seq)이 보통 선호됩니다.7
폴리아데닐화 RNA가 있는 모든 종은 Illumina Single Cell 3' RNA Prep 키트와 함께 사용할 수 있습니다.
자세한 내용은 Illumina Single Cell 3' RNA Prep 키트의 기능과 이점을 살펴보십시오.

단일세포 시퀀싱 자료


단일세포 웨비나
단일세포 데이터를 탐색하는 방법
단일세포 데이터를 탐색하는 방법

이 프레젠테이션은 3차 scRNA-Seq 분석의 기본 단계를 소개하며, 다양한 세포 집단이 외부 요인에 어떻게 반응할 수 있는지를 강조합니다.

단일세포 RNA 시퀀싱
여러 시험기관에서 단일세포 RNA 시퀀싱

기술 발전으로 단일 워크플로에서 여러 사이트의 단일세포 RNA-Seq를 사용할 수 있습니다. 데이터 품질, 취약한 세포 타입의 복구 등에 대해 알아보세요.

단일세포 멀티오믹스:
RNA-Seq을 넘어서는 단일세포 멀티오믹스

Michael Kelly 박사는 단일세포 시퀀싱 방법을 사용하여 청각 발달을 연구하고 NCI 암 연구 센터의 연구를 지원합니다.

주요 애플리케이션 노트
NextSeq 1000 및 NextSeq 2000 단일세포 RNA 시퀀싱 솔루션

비용 효과적이고 유연한 워크플로우로 단일세포의 유전자 발현을 측정하고, 고해상도 분석을 통해 보통 벌크 샘플링 방식으로는 알 수 없는 세포 간 차이점을 밝혀냅니다.

Single Cell Gene Expression + ATAC-Seq 솔루션

단일세포 유전자 발현과 크로마틴 접근성을 통합하여 유전자 조절을 주도하는 세포 메커니즘을 밝히는 데 도움을 줍니다.

NextSeq 1000 및 2000 시스템에서의 단일세포 및 공간 시퀀싱

XLEAP-SBS 화학 반응과 10x Genomics 단일세포 및 공간 솔루션을 결합하여 NextSeq 1000 및 NextSeq 2000 시스템에서 고분해능 유전체학을 구현하는 방법에 대해 알아보세요.

계속 둘러보기
암 단일세포 분석

NGS 기술을 사용하는 단일세포 시퀀싱은 개별 암세포의 유전체 또는 전사체를 검사하여 세포 간 변이에 대한 고해상도 보기를 제공합니다.

CITE-Seq

CITE-Seq(전사체 및 에피토프의 세포 인덱싱)는 단일세포 판독 내에서 세포 표면 단백질 및 전사체 데이터를 동시에 정량화하는 시퀀싱 기반 방법입니다.

전사체학

생물학에 대해 더 잘 이해하기 위해 전사체를 프로파일링합니다. 다양한 기법을 살펴보고 RNA-seq의 발견 역량이 어떤 방식으로 영향력 큰 연구를 지원할 수 있는지 알아보세요.

멀티오믹스

유전체학, 전사체학, 후성유전학 및 단백체학의 데이터를 결합하여 유전자형과 표현형을 더 잘 연결합니다.

ATAC-Seq

벌크 세포 집단 또는 단일세포에서 고해상도로 유전체 전반에서 열린 크로마틴의 영역을 평가합니다.

종양 미세환경 살펴보기

Alex Swarbrick 박사는 유방암과 전립선암에서 종양 미세환경을 연구하기 위한 단일세포 시퀀싱의 장점에 대해 논의합니다.

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참고 문헌

  1. Jovic D, Liang X, Zeng H, Lin L, Xu F, Luo Y. Single‐cell RNA sequencing technologies and applications: A brief overview. Clin Transl Med. 2022;12(3):e694. doi:10.1002/ctm2.694
  2. Baccin C, Al-Sabah J, Velten L, et al. Combined single-cell and spatial transcriptomics reveals the molecular, cellular and spatial bone marrow niche organization. Nat Cell Biol. 2020;22(1):38-48. doi:10.1038/s41556-019-0439-6
  3. Papalexi E, Satija R. Single-cell RNA sequencing to explore immune cell heterogeneity. Nat Rev Immunol. 2018;18(1):35-45. doi:10.1038/nri.2017.76
  4. Chen G, Ning B, Shi T. Single-Cell RNA-Seq Technologies and Related Computational Data Analysis. Front Genet. 2019;10:317. doi:10.3389/fgene.2019.00317
  5. Sant P, Rippe K, Mallm JP. Approaches for single-cell RNA sequencing across tissues and cell types. Transcription. 2023;14(3-5):127-145. doi:10.1080/21541264.2023.2200721
  6. Wiegleb G, Reinhardt S, Dahl A, Posnien N. Tissue dissociation for single-cell and single-nuclei RNA sequencing for low amounts of input material. Frontiers in Zoology. 2022;19(1):27. doi:10.1186/s12983-022-00472-x
  7. Stamper CT, Marchalot A, Tibbitt CA, et al. Single-cell RNA sequencing of cells from fresh or frozen tissue reveals a signature of freezing marked by heightened stress and activation. Eur J Immunol. 2024;54(4):e2350660. doi:10.1002/eji.202350660